土壤FDA水解酶活性檢測(cè)試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

貨號(hào)：BC0480

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑二：臨用前取1支加1.5 mL丙酮溶解，用不完的-20℃分裝保存一周，避免反復(fù)凍融；

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg熒光素，臨用前加入3.03 mL 50%丙酮（丙酮（V）：蒸餾水（V）=1:1）配成10 μmol/mL的熒光素標(biāo)準(zhǔn)溶液，可45℃水浴促進(jìn)溶解，-20℃分裝保存兩周，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說明：

FDA水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標(biāo)之一。

FDA是一種無色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩(wěn)定不易被分解，并在490nm處有強(qiáng)吸收峰，通過檢測(cè)490nm處的吸光值變化可計(jì)算得FDA水解酶活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、天平、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、丙酮（不可快遞）、研缽、30-50目篩。

三、FDA水解酶活性計(jì)算

酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。

FDA活性（U/g 土樣）=（ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品）×V反總÷W ÷T=48×（ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）÷W

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度 2μmol/mL；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d。

注意事項(xiàng)：

1. 盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣本，否則很難準(zhǔn)確反映酶的活性。

2. 測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值大于1.2，可適當(dāng)減少土樣質(zhì)量再測(cè)定。若吸光值過小，可增加土樣質(zhì)量或增加反應(yīng)時(shí)間來進(jìn)行測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1、 分別取兩管0.1g三葉草土于1.5mLEP管中，分別為對(duì)照管及測(cè)定管，按照測(cè)定步驟操作，取上清稀釋5倍進(jìn)行測(cè)定，用1mL玻璃比色皿測(cè)定吸光值，計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=1.148-0.066=1.082，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.499-0=0.499，按土壤質(zhì)量計(jì)算酶活得：

FDA活性（U/g 土樣）=48×（ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）÷W×5（稀釋倍數(shù)）= 5204.01 U/g 土樣。

2、 分別取兩管0.1g林土于1.5mLEP管中，分別為對(duì)照管及測(cè)定管，按照測(cè)定步驟操作，取上清稀釋5倍進(jìn)行測(cè)定，用1mL玻璃比色皿測(cè)定吸光值，計(jì)算ΔA測(cè)定= A測(cè)定-A對(duì)照=0.973-0.133=0.84，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.499-0=0.499，按土壤質(zhì)量計(jì)算酶活得：

FDA活性（U/g 土樣）=48×（ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）÷W×5（稀釋倍數(shù)）= 4040.08 U/g 土樣。

參考文獻(xiàn)：

[1] Sánchez-Monedero M A, Mondini C, Cayuela M L, et al. Fluorescein diacetate hydrolysis, respiration and microbial biomass in freshly amended soils[J]. Biology and Fertility of Soils, 2008, 44(6): 885-890.

[2] Paudel B R, Udawatta R P, Anderson S H. Agroforestry and grass buffer effects on soil quality parameters for grazed pasture and row-crop systems[J]. Applied Soil Ecology, 2011, 48(2): 125-132.

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