氨基酸（AA）含量檢測試劑盒 

氨基酸（AA）含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號: BC1570
規(guī)格: 50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前加入2 mL無水乙醇充分溶解，再加入28 mL蒸餾水混勻，2-8℃避光保存4 周；

2. 試劑四：臨用前加入3 mL蒸餾水，充分溶解，可以2-8℃保存4周；

3. 標準品：10 μmol/mL 谷*酸標準液；

4. 配制1.25 μmol/mL谷*酸標準溶液：臨用前取100μL 10 μmol/mL谷*酸標準溶液，加入700 μL蒸餾水，充分混勻，得到1.25 μmol/mL谷*酸標準溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產品說明：
動物肝臟、腎臟是氨基酸代謝的主要器官，故尿中氨基酸的變化最能反應肝、腎的生理狀態(tài)。另外，氨基酸還能反應灼傷、傷寒等方面情況。植物體內氨基酸含量對研究植物在不同條件下及不同生長發(fā)育時期氮代謝變化、植物對氮素的吸收、運輸、同化及營養(yǎng)狀況等有重要意義。
氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應，產生藍紫色化合物，在570nm有特征吸收峰；通過測定570nm吸光度，來計算氨基酸含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、無水乙醇（99%AR）、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件

實驗實例：

1. 取0.1045g合歡葉片組織加入1mL試劑一進行樣本處理，取上清稀釋2倍后按照測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定管=A測定管-A空白管=0.5457-0.1172=0.4285，ΔA標準管=A標準管-A空白管=1.0790-0.1172=0.9618，按樣本質量計算含量得：

氨基酸含量（μmol/g質量）=1.25×ΔA測定管÷ΔA標準管÷W×F =10.658 μmol/g 質量。

1. 取0.1051g大鼠肝臟組織加入1mL試劑一進行樣本處理，取上清稀釋6倍后按照測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定管=A測定管-A空白管=1.0535-0.1172=0.9363，ΔA標準管=A標準管-A空白管=1.0790-0.1172=0.9618，按樣本質量計算含量得：

氨基酸含量（μmol/g質量）=1.25×ΔA測定管÷ΔA標準管÷W×F =69.469 μmol/g 質量。

1. 取0.5mL馬血清加入0.5mL試劑一進行樣本處理，取上清稀釋4倍后按照測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定管=A測定管-A空白管=0.8865-0.1172=0.7693，ΔA標準管=A標準管-A空白管=1.0790-0.1172= 0.9618，按樣本體積計算含量得：

氨基酸含量（μmol/mL）=2.5×ΔA測定管÷ΔA標準管×F =7.999 μmol/mL。
相關發(fā)表文獻：

1. Li Z, Wang R, Gao Y, et al. The Arabidopsis CPSF30‐L gene plays an essential role in nitrate signaling and regulates the nitrate transceptor gene NRT 1.1[J]. New Phytologist, 2017, 216(4): 1205-1222.

2. Wang C, Zhang W, Li Z, et al. FIP1 plays an important role in nitrate signaling and regulates CIPK8 and CIPK23 expression in Arabidopsis[J]. Frontiers in plant science, 2018, 9: 593.

3. Wang N, Zhang X, Wang S, et al. Structural characterisation and immunomodulatory activity of polysaccharides from white asparagus skin[J]. Carbohydrate polymers, 2020, 227: 115314.

參考文獻：

1. Lee S W, Lim J M, Bhoo S H, et al. Colorimetric determination of amino acids using genipin from Gardenia jasminoides[J]. Analytica chimica acta, 2003, 480(2): 267-274.

2. Kalant H. Colorimetric Ninhydrin Reaction for Measurement of α-Amino Nitrogen[J]. Analytical Chemistry, 1956, 28(2): 265-266.

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