乙醇脫氫酶（ADH）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC1080
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 提取液：臨用前將粉劑一倒入提取液中，溶液為懸濁液，使用前需搖勻；

2. 試劑二：臨用取一支加入1.5mL蒸餾水，-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說(shuō)明：
ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶，催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換，在很多生理過(guò)程中起著重要作用。哺乳動(dòng)物ADH主要在肝臟生成，肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。
ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD⁺，NADH在340nm處有吸收峰，而NAD⁺沒(méi)有；測(cè)定340nm 吸光度下降速率，來(lái)計(jì)算ADH活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g大鼠肝臟按照提取和測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA空白管=A1-A2=0.558-0.557=0.001，ΔA測(cè)定管=A3-A4=0.812-0.587=0.225，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

ADH (U/g 質(zhì)量) =1.61×(ΔA測(cè)定管–ΔA空白管)÷W=1.61×(0.225–0.001)÷0.1=3.6064U/g 質(zhì)量。

1. 取小鼠血漿直接檢測(cè)，測(cè)得計(jì)算ΔA空白管=A1-A2=0.558-0.557=0.001，ΔA測(cè)定管=A3-A4=0.708-0.676=0.032，按液體體積計(jì)算酶活得：

ADH (U/mL) =1.61×(ΔA測(cè)定管–ΔA空白管)=1.61×(0.032–0.001)=0.04991 U/mL。
注意事項(xiàng)：

1. 若A3大于1.5或者A3小于A1，則需要將樣本用蒸餾水稀釋再進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算公式注意乘以稀釋倍數(shù)。

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