超氧陰離子含量檢測試劑盒說明書
 可見分光光度法
貨號(hào)：BC1290
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑四：自備氯仿；

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：10μmol/mL亞*。

產(chǎn)品說明：
生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用，但積累過多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。
超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO₂^-，NO₂^-在對(duì)*磺酰胺和萘*鹽酸鹽的作用下，生成紫紅色的偶氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根據(jù)A₅₃₀值可以計(jì)算樣本中O₂^－含量。
技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.00124 μmol/mL
線性范圍：0.0019-0.25μmol/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、氯仿和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。

2. 樣本制備好之后，立刻進(jìn)行測定，請(qǐng)勿將樣本進(jìn)行長時(shí)間的低溫保存，以免影響測定結(jié)果。

3. 試劑四有一定的毒性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g小鼠肝臟加入1mL提取液充分研磨，12000rpm，4℃，離心20min，取上清之后按照測定步驟操作，測得計(jì)算?A樣本=A測定管-A空白管=0.252-0.008=0.244，標(biāo)準(zhǔn)曲線y=5.1285x+0.013，計(jì)算x=0.045，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：

超氧陰離子含量（μmol/g 質(zhì)量）=2x÷W=0.9 μmol/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g木槿加入1mL提取液充分研磨，12000rpm，4℃，離心20min，取上清之后按照測定步驟操作，測得計(jì)算?A樣本=A測定管-A空白管=0.036-0.008=0.028，標(biāo)準(zhǔn)曲線y=5.1285x+0.013，計(jì)算x=0.0029，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：

超氧陰離子含量（μmol/g 質(zhì)量）=2x÷W=0.058 μmol/g 質(zhì)量。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Bingbing Cai,Qiang Li,Fengjiao Liu,et al. Decreasing fructose-1,6-bisphosphate aldolase activity reduces plant growth and tolerance to chilling stress in tomato seedlings. physioogia plantarum. December 2017;

2. Zhongyuan Liu,Peilong Wang,Tengqian Zhang,et al. Comprehensive analysis of BpHSP genes and their expression under heat stresses in Betula platyphylla. Environmental and Experimental Botany. August 2018;(IF3.712)

參考文獻(xiàn)：

1. 王愛國, 羅廣華. 植物的超氧物自由基與羥胺反應(yīng)的定量關(guān)系[J]. 植物生理學(xué)通訊, 1990, 6(3): 55-57.

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