γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號: BC1225
規(guī)格: 100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一工作液（在試劑一瓶中配制）：臨用前配制，把5mL試劑二倒入試劑一瓶中，充分溶解（室溫過低時可以40℃水浴促進溶解）。2-8℃可以保存4周

2. 工作液的配制：臨用前根據(jù)樣本量按試劑一工作液：試劑三=250μL：920μL（共1.17mL，約6T）的比例進行配制，限當(dāng)天用完。

產(chǎn)品說明：
γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨?；D(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨?；衔锏乃?，產(chǎn)生*氨酸鹽，在細胞外谷*甘肽新陳代謝中起了重要的作用。
γ-GT催化谷氨酰對硝*γ-谷氨?；D(zhuǎn)移給N-甘氨酰*氨酸，生成對硝*,在405nm有特征光吸收；通過測定405nm光吸收增加速率，來計算γ-GT酶活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：
培養(yǎng)細胞中γ-GT活性測定時，細胞中γ-GT的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞（防止因為蛋白質(zhì)變性導(dǎo)致酶失活）。
實驗實例：

1. 取0.1g腎臟加入1mL提取液進行勻漿研磨，于4℃，10000rpm離心15min，取上清液稀釋4倍按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA =（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）=（2.088-0.638）-（0.435-0.425）=1.44，按樣本質(zhì)量計算酶活得：γ-GT（U/g 質(zhì)量）=0.845×ΔA÷W×4（稀釋倍數(shù)）=48.67 U/g 質(zhì)量。

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