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尼龍膜、PVDF膜、NC膜區(qū)別

發(fā)布日期: 2015-12-01
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轉印膜:用于蛋白質和核酸的轉移和檢驗過程的微孔膜。

Southern blot:又稱Southern印跡雜交,是研究DNA圖譜的基本技術。

Northern blot:又稱Northern印跡雜交,是檢測RNA的基本技術。

Western blot:又稱Western印跡雜交,是蛋白質檢測分析的基本技術。

轉印膜在蛋白質和核酸的轉移和檢測過程中應用廣泛,不同的轉印膜規(guī)格和參數不同,選擇正確、均一穩(wěn)定的轉印膜對達到的實驗結果起到關鍵性的作用。

常用的三種轉印膜:硝酸纖維素膜(NC膜)、帶正電的尼龍膜(N66膜)、聚偏氟乙烯膜(PVDF膜)

轉印膜區(qū)別

  • 結合能力:帶正電的尼龍膜>PVDF膜>硝酸纖維素膜。

尼龍膜結合DNA和RNA能力可達480-600μg/cm2,可結合短10bp的核酸片段;硝酸纖維素膜結合DNA和RNA能力可達80-100μg/cm2,對于200bp的核酸片段結合能力不強;PVDF膜結合DNA和RNA能力可達125-300μg/cm2。

  • 結合穩(wěn)定性

更好的機械強度和化學耐受性使PVDF膜在各種染色應用和多重免疫檢測中成為理想選擇;而且單個凝膠的泳道復本可用于多種目的,特別是需要做N端蛋白測序,在相當“嚴酷”的清洗條件下,當尼龍膜或者硝酸纖維素膜已經降解的情況下PVDF膜依然保持本色,所以PVDF也是要做蛋白測序的*選擇,但不適合熒光。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預處理(不超過15秒)再用緩沖液平衡,才能用。

  • 溫度耐受性:

尼龍膜經烘烤或紫外線照射后,核酸中的部分嘧啶堿基可與膜上的正電荷結合;硝酸纖維素膜依靠疏水性相互作用結合DNA,結合不牢固;PVDF膜結合牢固,耐高溫,特別適合于蛋白印跡。

  • 機械強度:

硝酸纖維素膜較脆,易破碎,不能重復使用;尼龍膜和PVDF膜機械強度較高,可重復使用。

  • 價格比較:PVDF膜>硝酸纖維素膜>尼龍膜

  • 可重復性:

尼龍膜可反復用于分子雜交,雜交后,探針分子可經堿變性被洗脫下來;硝酸纖維素膜不能重復使用;PVDF膜可以重復使用。

  • 操作簡便性

NC膜的使用很簡便,比如不需要甲醛預處理,只要在無離子水面浸潤排出膜內氣泡,再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了;比如NC膜很容易封閉,也不需要特別嚴謹的清洗條件。轉移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長時間,不過要注意的是純的硝纖膜在比較脆,又容易卷,操作要小心,不適合用于需要多次重復清洗的用途。

  • 背景:NC膜和PVDF背景較低;尼龍膜背景高

注:

1、Biodyne B膜:通過高密度的季銨組來增加孔的表面。我們所生產的尼龍膜具有高的靈敏度,適用于各種核酸應用。

BiodyneC膜:可以通過孔表面的羧基組耦合反應來導出。

2、醋酸纖維素膜

由于醋酸纖維素薄膜對各種蛋白質(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都幾乎*不吸附,因此無拖尾現象;電泳后區(qū)帶界限清晰;通電時間較短(二十分鐘一小時);對染料也沒有吸附,因此不結合的染料能*洗掉,無樣品處幾乎*無色。由于醋酸纖維素薄膜吸水量較低,因此必需在密閉的容器中進行電泳,并使用較低有電流避免蒸發(fā)。同時其對蛋白的結合能力較其它轉移膜弱些。

轉印膜區(qū)別

轉印膜區(qū)別

轉印膜區(qū)別

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