植物蛋白提取試劑盒可從新鮮、冰凍或干燥植物組織中提取可溶性植物蛋白。適用于多種植物及植物的不同部位(如根、莖、葉、花、種子等)的蛋白提取,提取效率高、蛋白產(chǎn)量大、活性高、速度快。
所提蛋白可直接進行蛋白電泳分析、免疫沉淀、WesternBlot、蛋白活性測定及蛋白純化等實驗。所提蛋白可用BCA蛋白定量試劑盒(ZJ101)進行濃度的測定。
植物蛋白提取試劑盒操作說明:
由于A組分溶解較慢,所以實驗前需要提前從冰箱中取出溶解待使用!取適量的A組分,按照B組分與A組分1:100的比例進行配置好裂解緩沖液。
一、植物細胞樣品蛋白提取
1、離心收集植物細胞,按照每5~10×105細胞加入100-200μL的裂解緩沖液的比例。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸,在冰上裂解5-10min。
2、充分裂解后,10000-14000g離心5min,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
二、對于植物原生質(zhì)體樣品
1、把組織剪切成細小的碎片,制備原生質(zhì)體。(可選)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體,繼續(xù)培養(yǎng)16-48h,并可以根據(jù)需要給予適當(dāng)?shù)膶嶒灄l件處理。
2、100-500g低速離心收集原生質(zhì)體。
3、按照每5~10×105原生質(zhì)體加入100-200μL的裂解緩沖液。輕彈管底以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的原生質(zhì)體沉淀。如果原生質(zhì)體量較多,必需分裝成5~10×105原生質(zhì)體/管,然后再裂解。