考馬斯亮藍染色法也稱考馬斯藍法(coomassie blue staining)又稱Bradford法。是測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結合法的一種。由于其突出的優(yōu)點,正得到越來越廣泛的應用。
下面就著重介紹下考馬斯亮藍染色法原理。
考馬斯亮藍染色是測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結合法的一種。在游離狀態(tài)下呈紅色,大光吸收在488nm;當它與蛋白質(zhì)結合后變?yōu)榍嗌?,蛋白質(zhì)-色素結合物在595nm波長下有大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比,因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。
蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內(nèi)達到平衡,完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。該法是1976年Bradford建立,試劑配制簡單,操作簡便快捷,反應非常靈敏,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測定微克級蛋白質(zhì)含量,測定蛋白質(zhì)濃度范圍為0~1 000μg/mL,小可測2.5μg/mL蛋白質(zhì),是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測定方法。
考馬斯亮藍分為R-150、R-250、R-350、G-250等。其中R-350為靈敏,R為紅藍色,G為綠藍色。索萊寶是專業(yè)生化試劑供應商。提供考馬斯R-250、G-250等染色液,常備現(xiàn)貨。
G-250 R-250